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                        技術文章   Article首頁>>技術文章>>豬特定基因序列PCR檢測試劑盒準備試劑與收集血樣

                        豬特定基因序列PCR檢測試劑盒準備試劑與收集血樣

                        點擊次數:304 更新時間:2023-11-07

                        豬特定基因序列PCR檢測試劑盒準備試劑與收集血樣:

                        雙重核酸試劑盒(熒光PCR法) 1.  收集標本:血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時;更長時間須冷凍( -20   ℃或 -70   ℃ )保存,避免反復凍融。

                        2.  標準品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管,管加標本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反復作對倍稀釋,從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

                        3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。

                        4.  洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)

                        檢測程序:

                        1.  加樣:每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ,將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

                        2.  洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。

                        3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

                        4.  洗板:同前。

                        5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

                        6.  洗板:同前。

                        7.  每孔加入底物工作液100ul ,置 37   ℃ 暗處反應15 分鐘。

                        8.  每孔加入100ul 終止液混勻。

                        9.  30分鐘內用酶標儀在 45 0 nm 處測 吸光值。

                        性能:

                        1. 準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值,大于等于0.9900。

                        2. 靈敏度:檢測濃度小于0.1 U/mL。

                        3. 特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

                        4. 重復性:板內、板間變異系數均小于15%。

                        5. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

                        6. 有效期:6個月


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